DNS 試劑(NY/T 法)使用步驟說明

產品簡介：

植物體內的碳素營養狀況以及農產品的品質形狀，常以糖含量作為重要指標，單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖，可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性，通過測定水解后的單糖含量對總糖進行測定。

DNS 試劑(NY/T 法)由氫氧化鈉、3,5-二硝基水楊酸、酒石酸鉀鈉、酚等配制而成，DNS 濃度為 6.3g/L，是植物總糖和還原糖檢測(硝基水楊酸法)的成分之一，其檢測原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內還原糖的量與棕紅色產物的顏色深淺程度呈一定比例關系，在540nm處測定棕紅色物質的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關系，利用比色法和標準曲線測得樣品中的還原糖和總糖的含量。DNS 試劑也常用果膠酶、淀粉酶、纖維素酶、木聚糖酶等的活性測定。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、蒸餾水、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

2、剪刀、勻漿器或研缽、50ml 離心管、離心機、水浴鍋或恒溫箱、分光光度計、比色皿

操作步驟(僅供參考)：

1、還原糖的提取：①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉移至燒杯或三角瓶中，用12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉移至該容器。②50℃水浴 30min，并不時攪拌，以便還原糖徹-底浸出。③將沉淀和浸出液轉移至 50ml 離心管，4000g 離心 5min。④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸餾水，混勻，再次 4000g 離心5min。⑤留取上清液，將 2 次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至 100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測液。

2、總糖的水解和提取：①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉移至燒杯或三角瓶中，用12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉移至該容器。②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸 30min，并不時攪拌。③取 2 滴滴加于載玻片上，滴加 1 滴顯色液，檢查水解是否完-全，如已經水解完-全則不顯示藍色。④水解完畢后，冷卻至室溫，加入 6M 氫氧化鈉溶液，使溶液 pH 至7.4 左右，用蒸餾水定容至 100ml，混勻，4000g 離心 5min 或過濾，獲得上清或濾液。⑤取上清或濾液 10ml，用蒸餾水定容至 100ml，成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液)，取 1ml 總糖水解液，測定其還原糖的含量。

3、制作葡萄糖標準曲線：取干凈離心管或試管，按下表進行操作，以0 號調零，檢測540nm處吸光度，以吸光度為縱坐標，各標準濃度(mg/ml)為橫坐標作圖得標準曲線。

 4、還原糖測定：取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液 1ml，分別加入DNS 試劑2ml，其余操作同標準曲線的操作，540nm 處測定各管的吸光度。

 計算：

還原糖的百分含量：

還原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100

總糖的百分含量：

總糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9

式中：C=從標準曲線查的糖量(mg)

VT=提取液的體積(ml)

m=植物樣品的質量(mg)

Vs=測定時用的樣品體積(ml)

注意事項：

1、 該試劑避免反復凍融，以免失效或效率下降，盡量避光保存。

2、 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時，應小心操作，避免傷人。